hiPSC人诱导多能干细胞培养教程:在培养hiPSC细胞前—mt4电脑版下载3、换液及传代管理前，提拔瓶竖着安排起码半小时（使细胞重到瓶底）；搜集上清，必需将瓶内一共提拔基（70ml）整体搜集！并用PBS（10ml）润洗瓶底并搜集！离心转速为1000rpm，5min。

　　苏醒发货（T25瓶免运输用度）/ 冻存发货（需加干冰运输用度） 顺丰疾递

　　伺探好细胞形态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度提拔箱安排2-4h，以便安谧细胞形态

　　1:2传代即是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

　　b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于提拔瓶中，使消化液浸润一共细胞，将提拔瓶置于37℃提拔箱中消化1-3 min（视细胞状况而定），然后正在显微镜下伺探细胞消化状况，若细胞大部门变圆并零落，急忙拿回操作台，加2-3ml十足提拔基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL提拔液后吹匀。

　　c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL提拔基的新皿中或者瓶中，置于提拔箱中提拔。

　　将含有1 mL细胞悬液的冻存管正在 37℃水浴中急忙摇晃解冻，加4 mL提拔基夹杂平均。正在1000 rpm要求下离心5 min，弃去上清液，加1-2 mL提拔基后吹匀。然后将一共细胞悬液出席含适量提拔基的提拔瓶中提拔留宿（或将细胞悬液出席6 cm皿中，出席约4 mL十足提拔基，提拔留宿）。第三天换液并查验细胞密度。

　　1.运输用的提拔基（灌液提拔基）不行再用来提拔细胞，请换用遵守仿单细胞提拔要求新配制的十足提拔基来提拔细胞。

　　2.因运输题目，部门细胞因为温度改变及热烈碰撞断命破裂酿成碎片，是平常形象。

　　1.收货时若创造干冰化完，查验冻存管是否融解，若已融解需直接离心细胞接种伺探，若未融解能够将细胞按平常次序存在；

　　1.收到细胞后，起首伺探并照相记载细胞瓶是否周备，提拔液是否有漏液、混淆等形象，干冰运输的细胞查验干冰是否十足挥发，细胞是否解冻，若有上述形象发作请实时和咱们相干。

　　2.静置达成后，取出细胞提拔瓶，镜检、照相（当天以中式 2,3 天请照相），记载细胞形态 (所照相片将动作后续供职依照)；创议细胞传代提拔后，按期照相、记载细胞发展形态。

　　3.因为运输的缘故，片面敏锐细胞会显现担心谧的状况，请实时和咱们相干，见知细胞的全体状况，以便咱们的身手职员跟踪回访直至题目处理。

　　4.详明阅读细胞仿单，明晰细胞联系音讯，如细胞状态、所用提拔基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞提拔要求类似，若因为提拔要求不类似而导致细胞显现题目，仔肩由客户自行负责。

　　备注：客户正在细胞提拔流程中，有任何身手题目能够拨打身手供职电线，咱们随时予以解答。

　　a、搜集细胞及细胞提拔液，装入无菌离心管中，1000 rpm要求下离心4 min，弃去上清液，用PBS洗刷一遍，弃尽PBS，加1 mL血清重悬细胞，举办细胞计数。

　　c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌积储。记载冻存管身分以便下次拿取。

　　冻存细胞转入液氮后实时苏醒一管查验细胞冻存活性，若有很是，实时调解实践计划

　　1.细胞运输途中碰到的各式题目，细胞遗失、瓶身破损、提拔液要紧漏液等，重发；

　　4.常温发货的细胞静置 2 小时后，干冰冻存发货的细胞苏醒 2 天后，绝大大批细胞未存活，经核实后，重发；

　　5.常温发货的细胞静置 22 小时而且未开封或干冰冻存发货的细胞苏醒 2 天后，显现污染，经核实后，重发；

　　6.细胞活性题目，请正在收到产物 3 天内给咱们提出确实的实践结果，用台盼蓝染色法审定细胞生机，经核实后，重发；

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